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发布时间:2022-07-03 04:32:08
恒温快速扩增***盒出现假阳性的结果,可能的原因有哪些?
如果在无模板对照中观察到假阳性结果,则通常是由污染引起的。我们建议区分***配制区和扩增分析区。在使用任何扩增后打开反应管的终点检测方法时,必须采用严格的污染控制措施。要排除或清除污染,我们建议用消毒液或 75%的酒精对工作区域进行消毒,并使用新的扩增***(溶解剂等)。可能需要重复几次清洁,才能完全清除污染。
恒温扩增常用酶
恒温扩增的方法多种多样,其对应的酶体系也各有差别,且一般为多酶体系,在酶原料选择上相比PCR复杂,下面只列举一些主要的恒温扩增方法相关酶。
LAMP相关酶环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification, LAMP)所用酶主要为具有链置换功能的DNA聚合酶,详细原理可参考聊聊恒温扩增技术。常用酶为Bst DNA聚合酶,用于DNA链合成,同时具有链置换功能;若检测模板为RNA,则可加入逆转录酶配制成RT-LAMP反应体系。
科普|恒温扩增***盒常用酶原料
NEAR相关酶
切口酶扩增反应(Nicking Enzyme Amplification Reaction, NEAR)是一种基于切刻内切酶切割特性的恒温扩增方法,详细原理可参考啥黑科技可10分钟完成核酸分子检测?。其使用的酶有两种:切刻内切酶:如Nt.BstNBI切刻内切酶,该类酶不同于常规限制性内切酶,其识别特定序列后仅在DNA其中一条链上切割形成缺口,并暴露出游离的3’端;DNA聚合酶:如Vent (exo-) DNA聚合酶或Bst DNA聚合酶,用于DNA链合成,同时具有链置换功能。
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